CROMATOGRAFÍA DE AMINOÁCIDOS
AUTORES:
Pamela Valdivieso
Joselyn Caminos
1.-OBJETIVOS
1.1.OBJETIVO GENERAL:
Determinar la
cromatografía de los aminoácidos.
1.2.OBJETIVOS
ESPECÍFICOS
- Conocer
las dos fases que presenta la cromatografía.
- Comparar el resultado entre la cromatografía de aminoácidos obtenidos y el estándar.
2.-MARCO TEÓRICO:
CROMATOGRAFÍA
La cromatografía es
un método físico de separación para la caracterización de mezclas complejas, la
cual tiene aplicación en todas las ramas de la ciencia. Es un conjunto de
técnicas basadas en el principio de retención selectiva, cuyo objetivo es
separar los distintos componentes de una mezcla, permitiendo identificar y
determinar las cantidades de dichos componentes. Diferencias sutiles en el
coeficiente de partición de los compuestos da como resultado una retención
diferencial sobre la fase estacionaria y por tanto una separación efectiva en
función de los tiempos de retención de cada componente de la mezcla.
La cromatografía
puede cumplir dos funciones básicas que no se excluyen mutuamente:
Separar los
componentes de la mezcla, para obtenerlos más puros y que puedan ser usados
posteriormente (etapa final de muchas síntesis).
Medir la proporción
de los componentes de la mezcla (finalidad analítica). En este caso, las
cantidades de material empleadas son pequeñas.
tipos de
cromatografía más utilizados para la separación de aminoácidos
- CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA.
La cromatografía en
capa fina consiste en la separación de mezclas de moléculas mediante el
principio del reparto entre dos fases. En general, una cromatografía se realiza
permitiendo que la mezcla de moléculas que se desea separar (lo que corresponde
a la muestra) interaccione con un medio o matriz de soporte que se denomina
fase estacionaria. Un segundo medio (la fase móvil) que es inmiscible con la
fase estacionaria se hace fluir a través de ésta para "lavar" (eluír)
a las moléculas en la muestra.
En la cromatografía
de capa fina, la fase estacionaria es una delgada capa de un soporte sólido
granulado, tales como gel de sílica, alúmina, ácido silícico u otros, que se
depositan sobre una placa de vidrio, aluminio u otro soporte inerte. Para que
adquiera firmeza y no se desmorone, la capa de fase estacionaria se aglutina
con una pequeña cantidad de sulfato de calcio u otro agente cementante. Las
muestras se aplican añadiendo pequeñas gotas de solución en un pequeño círculo
cerca del extremo inferior de la placa. La gota se deja secar y si se desea
poner más muestra se pueden aplicar más gotas, cuidando de que la mancha no se
haga demasiado grande.
- Cromatografía líquida en columnas de
intercambio aniónico
En este caso, los
aminoácidos se hacen pasar por una columna de resina con un grupo catiónico.
Los aminoácidos, según su carga se van a unir a la columna y luego, mediante un
cambio gradual en el pH del solvente que se aplica a la columna, se va eluyendo
cada aminoácido a un pH distinto (según su punto isoeléctrico). Como algunos
aminoácidos son más difíciles de separar que otros, a menudo es necesario
emplear una columna corta para separar un grupo de aminoácidos y una columna
larga para separar los aminoácidos restantes
- Cromatografía líquida de alta resolución en
columnas de fase reversa.
Este método consiste
en aplicar los aminoácidos disueltos en una fase acuosa acidificada a una
columna de sílice unida a una cadena hidrocarbonada. Los aminoácidos, según su
polaridad se van a unir a la columna y entonces el eluyente se mezcla
gradualmente con cantidades cada vez mayores de un solvente menos polar que el
agua. Los aminoácidos van siendo lavados de la columna conforme la polaridad
del solvente baja lo suficiente.
- Cromatografía de Reparto
En la presente
práctica llevaremos a cabo una cromatografía de reparto, en capa fina, para la
separación de aminoácidos. En la cromatografía de reparto los componentes de
una mezcla se separan en base a una distribución diferente entre la fase móvil
yla fase estacionaria. El movimiento relativo de las moléculas a lo largo del
sistema cromatográfico es el resultado de un equilibrio entre las fuerzas de
transmisión o arrastre ejercido por la fase móvil en su desplazamiento sobre la
fase estacionaria y las fuerzas que tienden a frenar dicho desplazamiento. Las
fuerzas de frenado pueden ser tanto de reparto (basado en criterios de
solubilidad) como de adsorción.
SEPARACIÓN DE
AMINOÁCIDOS.
Las mezclas de
aminoácidos pueden separarse en placas de capa fina de gel de sílica, empleando
como fase móvil butanol: agua: ácido acético (4:1:1). Las manchas de los
aminoácidos pueden detectarse sobre la placa desarrollada, si después de
secarla se asperja con una solución de ninhidrina.
Los aminoácidos
aparecen como manchas púrpura sobre un fondo ligeramente amarillento. Sin
embargo, la prolina (que no produce amonio libre al reaccionar con ninhidrina)
genera una mancha de color amarillo obscuro.
Este método, aunque
no es muy sensible, se empleó con frecuencia en los primeros estudios de la
composición de las proteínas. En la actualidad ha sido desplazado por la
cromatografía líquida de alta resolución, ya que esta última es más confiable
para la cuantificación y tiene mayor sensibilidad si los aminoácidos se
detectan por fluorescencia.
3.-PROCEDIMIENTO:
4.- CÁLCULOS:
RESULTADOS TEÓRICOS
Ácido aspartico
Rf1 = (3/13.5)
Rf1 = 0.222
Trip
Rf2 = (4,8/13.5)
Rf2 = 0.35
Tir
Rf3= (5,2/13.5)
Rf3 = 0.38
T eni
Rf4 = (6,4/13.5)
Rf4 = 0.47
Hidrólisis gluten
Rf5 = (0,5/13.5)
Rf5 = 0.037
5.- DISCUSIÓN:
Las características que tuvo el papel
de cromatografía en la cual tuvo un solvente adecuado ya que nos
identifica los 4 aminoácidos presentes en la muestra de gluten , en este caso
no hubo aminoácidos no identificados.
El solvente utilizado da una buena
separación, las sustancias no identificadas deben correr con otro solvente y
hacer correr por mayor tiempo para que la separación sea mejor la cual la
hidrólisis de gluten nos identifica los cuatro aminoacidos.
6.- CONCLUSIONES:
- La Fase Móvil es un Gas y la Fase Estacionaria
puede ser un sólido.
- En la muestra problema hay una mezcla de cuatro aminoácidos
presentes en una muestra de gluten en el cual todos han sido
identificados.
7.- BIBLIOGRAFÍA:
(s.f.).
javeriana.edu. (s.f.). Recuperado el 19 de
julio del 2014 de,
monografias. (s.f.). Recuperado el 19 de julio del 2014 de,
es.scribd. (3351). Recuperado el 19 de julio del 2014 de,
